场景一: 十年前八月的一天,我们家热热闹闹地搬进了现在这个家。告别了29平米的陋居,第一次搬到有大阳台,大客厅的新居,兴奋之情不在话下。可就是远了点,10年前还是自行车的时代,只有一路公交车经过我家,去市区总感觉要经过慢慢征途。
和现在比起来,我家已经算很市区了。到
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⑵ 单抗理化特性的鉴定
从实用意义上说,单抗对温度和PH变化的敏感性以及单抗的亲合力都是理化特性鉴定的主要项目,它们可为单抗的使用和保存提供重要依据。其中单抗亲合力测定比较复杂,下面作简要介绍。
抗体亲合力是指抗体与抗原或半抗原结合的强度,其高低主要是由抗体和抗原分子的大小、抗体分子结合簇(部)和抗原决定簇之间的立体构型的合适程度决定的。亲合力通常以平均内在结合常数(K)表示。
单抗亲合力测定是十分重要的,它可为正确选择不同用途的单抗提供依据。在建立各种检测方法时,应选用高亲合力的单抗,以提高敏感性和特异性,并可节省试剂。而在亲和层析时,应选用亲合力适中的单抗作为免疫吸附剂,因为亲合力过低不易吸附,亲合力过高不易洗脱。
精确测定单抗的亲合力是较困难的,好在实际应用中选择单抗时,通常只需测定各单抗的相对亲合力及其高低排列次序。常用的方法有竞争ELISA、非竞争性ELISA 、间接ELISA、间接法夹心ELISA等,这里仅介绍竞争性ELISA测定单抗亲和常数的方法。其步骤是:
取适宜浓度的纯化
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⑷ 放射免疫测定
放射免疫测定是用放射性同位素标记抗原或抗体,以检测相应抗原或抗体的定量方法。在筛选和鉴定单抗时常用抗原固相法,即用抗原包被聚乙烯微板,借以检测样品中的McAb,其操作步骤如下:
a. 用碳酸盐缓冲液将抗原稀释至适宜的浓度(1-100ug/ml),滴加聚乙烯微板孔内,100ul/孔,4℃过夜或37℃ 2小时。
b. 弃去抗原液,每孔加100ul含0.5-1% BSA的PBS,4℃ 1-2小时封闭。
c. 用BSA-PBS洗涤3次,每次3分钟。
d. 加待检样品,每孔100ul,设立阴性孔、阳性孔和空白孔;37℃1-2小时,同法洗涤。
e. 每孔加125I标记的抗鼠Ig抗体工作液100ul,37℃ 1-2小时,同法洗涤。
f. 用γ-射线闪烁计数仪分别测定各孔放射性。通常要求样品孔和阳性对照孔的放射性脉冲分别超过本底5倍和10倍。若以空白孔的放射性为基准,凡样品孔与阴性孔放射性之比大于3的样品定为阳性。
4、杂交瘤细胞的克隆化
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一、单克隆抗体的概念
抗体是机体在抗原刺激下产生的能与该抗原特异性结合的免疫球蛋白。常规的抗体制备是通过动物免疫并采集抗血清的方法产生的,因而抗血清通常含有针对其他无关抗原的抗体和血清中其他蛋白质成分。一般的抗原分子大多含有多个不同的抗原决定簇,所以常规抗体也是针对多个不同抗原决定簇抗体的混合物。即使是针对同一抗原决定簇的常规血清抗体,仍是由不同B细胞克隆产生的异质的抗体组成。因而,常规血清抗体又称多克隆抗体(polyclonal antibody),简称多抗。由于常规抗体的多克隆性质,加之不同批次的抗体制剂质量差异很大,使它在免疫化学试验等使用中带来许多麻烦。因此,制备针对预定抗原的特异性均质的且能保证无限量供
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