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人生有几个十年 (2008-06-22 10:16)

从3653天前考完那门考试,更精确地说,从算错了那道三元一次方程后,人生的方向就起了变化。

在那之前有父母的宠爱,没真正体会过失败与无奈;在那之后懂得了努力未必有收获,但要想有收获必须得努力,努力过后即使失败也问心无愧。

在那之后相当长一段时间里总是觉得做事情缺运气,典型事件:高考和考研都差了一分。但回头看这十年里那些缺运气的事情未必都是坏事,很多时候幸亏差了一点运气,否则结果还不如现在。福兮祸所伏,祸兮福所倚。

这是伴随着各种考试的10年,对于以考试为主旋律的这段时光给自己的打分是60。理由是没有任何值得炫耀的结果,但却基本能在剩下最后一滴血时将关底打通。如果说王冠上的砖石是耀眼的幸运,那么救命稻草也同样应该珍惜。

下一个10年会怎样?

可以肯定的是,那时候会35岁;应该会有自己的房子、媳妇、孩子;也许会有稳定的收入;这是一个伴随着为事业拼搏的10年,这比用一把尺子来精确比长短的上一个10年不同,它注定会充满各种机关与暗道。躲避机关,把握暗道,尽力为之。

再下一个10年会怎样?

可以肯定的事情只有那时候45岁,我孩子应该会体会到我10年前经历的一切了。

bacmid (2008-04-13 22:53)
 取名为Bac—to—Bac
表达系统,意即从细菌(bacterium)到杆状病毒
(baculovirus),革命性地改变了重组昆虫杆状病毒的
构建方法.其基本原理为:将一个改造后的AcNPV
基因组转化入大肠杆菌,使它像普通质粒一样能在
细菌内复制(由于太大,只限单拷贝),将其称之为杆
状病毒穿梭载体(baculovirus shuttle vector,又称病毒
质粒baculovirus plasmid,将其首尾合写而成为
Bacmid),通过位点特异性转座,在大肠杆菌内完成
病毒基因组的重组.杆状病毒穿梭载体Bacmid
有细菌单拷贝数mini—F复制子,卡那霉素抗性选择
标记基因及编码J3一半乳糖苷酶a肽的部分DNA片
段(图2).在lacZa基因的N氨基末端插入一小段
含有细菌转座子Tn7整合所需的靶位点(mini—att
Tn7),但它的插入不影响lacZa基因的表达阅读框.
将杆状病毒穿梭载体(130 kb)转化入大肠杆菌
DHIO~,获得转化子将其命名为DHIOBac.因此杆状
维普资讯 http://www.cqvip.com
转帖 质粒的提取 (2008-04-13 22:45)
 
 
2007-06-30 16:16
【转贴】质粒提取的原理


为了方便理解,这里罗列一下碱法质粒抽提用到三种溶液:
溶液I,50 mM葡萄糖 / 25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA,pH 8.0;
溶液II,0.2 N NaOH / 1% SDS;
溶液III,3 M 醋酸钾 / 2 M 醋酸。

让我们先来看看溶液I的作用。任何生物化学反应,首先要控制好溶液的pH,因此用适当浓度的和适当pH值的Tris-Cl溶液,是再自然不过的了。那么50 mM葡萄糖是干什么的呢?说起来不可思议,加了葡萄糖后最大的好处只是悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部。因此,如果溶液I中缺了葡萄糖其实对质粒的抽提本身而言,几乎没有任何影响。所以说溶液I中葡萄糖是可缺的。那么EDTA呢?大家知道EDTA是Ca2+和Mg2+等二价金属离子的螯合剂,配在分子生物学试剂中的主要作用是:抑制DNase的活性,和抑制微生物生长。在溶液I中加入高达 10 mM 的EDTA,无非就是要把大肠杆菌细胞中的所有二价金属离子都螯合掉。如果不加EDTA,其实也没什么大不了的,
转帖 质粒的提取 (2008-04-13 22:45)
 
 
2007-06-30 16:16
【转贴】质粒提取的原理


为了方便理解,这里罗列一下碱法质粒抽提用到三种溶液:
溶液I,50 mM葡萄糖 / 25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA,pH 8.0;
溶液II,0.2 N NaOH / 1% SDS;
溶液III,3 M 醋酸钾 / 2 M 醋酸。

让我们先来看看溶液I的作用。任何生物化学反应,首先要控制好溶液的pH,因此用适当浓度的和适当pH值的Tris-Cl溶液,是再自然不过的了。那么50 mM葡萄糖是干什么的呢?说起来不可思议,加了葡萄糖后最大的好处只是悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部。因此,如果溶液I中缺了葡萄糖其实对质粒的抽提本身而言,几乎没有任何影响。所以说溶液I中葡萄糖是可缺的。那么EDTA呢?大家知道EDTA是Ca2+和Mg2+等二价金属离子的螯合剂,配在分子生物学试剂中的主要作用是:抑制DNase的活性,和抑制微生物生长。在溶液I中加入高达 10 mM 的EDTA,无非就是要把大肠杆菌细胞中的所有二价金属离子都螯合掉。如果不加EDTA,其实也没什么大不了的,
 大肠杆菌电转化感受态细胞制备
第一天:
1. 将适合菌株(如XL1-Blue, DH5α)置于LB或其他营养丰富的培养基上,在37°C下过夜培养
2. 高温灭菌大的离心瓶(250-500ml)以备第二天摇瓶用
3. 准备几瓶灭菌水(总量约1.5升),保存于冷冻室中以备第二天重悬浮细胞用

第二天:
4. 转移0.2-1ml过夜培养物至装有500ml LB(或其他营养丰富的培养基)的1-2升挡板∑恐?
5. 37°C下剧烈振荡培养2-6小时
6. 定时监控O.D.600值(培养1小时后每半小时测定一次)
7. 当O.D.600值达到0.5-1.0时,从摇床中取出摇瓶,置于冰上冷却至少15分钟(需要的话这种方式可以存放培养液数小时)
8. 细胞在4°C 5000g下离心15分钟,弃上清液(如需要,沉淀可在4°C的10%甘油中保存一两天)
9. 用灭菌的冰水重悬浮细胞。先用涡旋仪或吸液管重悬浮细胞于少量体积中(几毫升),然后加水稀释至
PCR位点突变SOE (2008-04-05 22:10)
恩,我的理解
如果是这样那么大概的过程应该是:
设计四条引物。
其中两条里故意包含互补的错误碱基,这两条引物除了错误碱基处外,其他位置正好与目的错误处的两端其他碱基是完全互补的。
另外两条引物是离的很远的上下游引物,不含错误。
然后取一条包含错误的,和一条离的很远的引物,做PCR反应,得出产物;
另外一组也是这么搞,得出产物;这两组产物在那段错误处左右是有重叠的;
将这两组P出来的产物作为模板混一起;
然后再用远离的上下游引物最后P一把这个混合产物,
最后就得出的就是突变出来的序列了。
奥运点火者应该是姚明 (2008-04-01 07:35)
 以刘翔开始,那么该以谁结尾呢?
过程应该是姚明拿个带火的篮球投篮。
 前几日发现楼前的树上落了一只喜鹊,没太在意,以为是过路的小鸟在休息。今天,猛然发现不是一只而是一对喜鹊在那棵树上搭起了窝!
凭我的感觉它们应该是年轻的两只鸟,因为一只在那活蹦乱跳的,而且腹部非常白,看上去很嫩,是对青年夫妇。
看到它们,我很高兴,因为喜鹊是吉祥的象征。
但也担心,在这座钢筋铁骨的城市里,在附近只有孤零零这么一棵树的情况下,它们能坚持下去吗?食物去哪搞?会不会有人看它们稀奇抓或杀了它们。
这里离动物园旧址不远,动物园附近还有一条人工河,我看它们向那个方向飞去了。
我没有数码相机,要不就把它们拍下来,它们的命运我会关注。
 今天,挺特别的,是白捡的一天时间,四年后博客不一定变成什么样子了呢!顶。
 
省份 人民币 美元接近国家 世界排名

    上海 66110 9259 智利 52

  北京 56044 7849 赤道几内亚 57

  天津 43000 6022 马来西亚 67

  浙江 37130 5200 保加利亚 74

  江苏 33000 4622 苏里南 78

  广东 28600 4006 白俄罗斯 81

  山东 28000 3921 伊朗 83

  福建 25424 3561 泰国 92

  辽宁 25110 3517 马其顿 91

  内蒙古 21430 3001 马尔代夫 98

  河北 20000 2801 乌克兰 100

  黑龙江 18455 2585 危地马拉 103

  吉林 18040 2527 危地马拉 103

  山西 17002 2381 摩洛哥 105

  新疆 15450 2164 格鲁吉亚 108

  湖北 15040 2106 萨摩亚 110

  河南 15000 2100 汤加 109

  海南 13630 1909 叙利亚 112

  湖南 13123 1838 叙利亚 112

  重庆 13097 1834 瓦努阿图 113

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