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基因工程的表达载体——原核细胞表达载体(2)-PL和PR启动子表达载体系统

(2018-11-20 08:44:58)
标签:

教育

基因工程表达载体

原核细胞表达载体

pl和pr启动子表达载体

分类: 选修部分

      PL和PR启动子表达载体系统

    PLPR启动子是大肠杆菌λ噬菌体中控制早期转录的启动子, PLPR表达载体系统是以该启动子构建的高效表达载体。在野生型λ噬菌体中,PLPR启动子的转录与否决定λ噬菌体进入裂解循环或溶原循环。λ噬菌体PE启动子控制的CI基因表达产物是PLPR启动子转录的阻遏物,而CI阻遏物的表达和在细胞中的浓度,取决于一系列宿主与噬菌体因子之间的复杂平衡关系。

由于通过细胞因子调节CI在细胞中含量的途径很难操作,因而在构建表达系统时,选用温度敏感突变体CIts857的基因产物来调控PLPR启动子的转录, 在较低温度(30)下阻遏物以活性形式存在,在较高温度(42)下阻遏作用失活。因此,改变工程菌的培养温度即可控制目的基因的表达,这比用诱导剂诱导表达的系统要节省操作步骤和成本,在大规模基因表达中优点尤其明显。

由于普通的大肠杆菌中不含CI基因表达产物,因此必须对表达载体或大肠杆菌进行遗传改造,将CIts857基因组装在表达载体上或整合在宿主染色体上。本身带有CIts857基因的表达载体,能自身编码CIts蛋白,对宿主的选择范围较宽;本身不带CIts857基因的表达载体,选择宿主菌时,要求宿主是有缺陷的原噬菌体溶源化的菌株(M5219)。前一类载体表达效率往往更高。

图示为pBV220表达载体的结构示意图。血管生长素(ANG)基因插入pB220载体多克隆位点中,转化到大肠杆菌JM103内,便能通过温度的变换控制CI阻遏蛋白的活性,继而调节PLPR启动子的活性,使ANG基因连同其5′端上游所带的SD 序列转录成mRNA (SD序列与起始密码ATG的间距为6bp)mRNA作为模板使核糖体高效翻译出ANG产物,并终止于rrnB位点。

基因工程的表达载体——原核细胞表达载体(2)-PL和PR启动子表达载体系统



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