基因工程的表达载体——原核细胞表达载体(2)-PL和PR启动子表达载体系统
(2018-11-20 08:44:58)
标签:
教育基因工程表达载体原核细胞表达载体pl和pr启动子表达载体 |
分类: 选修部分 |
由于通过细胞因子调节CI在细胞中含量的途径很难操作,因而在构建表达系统时,选用温度敏感突变体CIts857的基因产物来调控PL和PR启动子的转录, 在较低温度(30)下阻遏物以活性形式存在,在较高温度(42)下阻遏作用失活。因此,改变工程菌的培养温度即可控制目的基因的表达,这比用诱导剂诱导表达的系统要节省操作步骤和成本,在大规模基因表达中优点尤其明显。
由于普通的大肠杆菌中不含CI基因表达产物,因此必须对表达载体或大肠杆菌进行遗传改造,将CIts857基因组装在表达载体上或整合在宿主染色体上。本身带有CIts857基因的表达载体,能自身编码CIts蛋白,对宿主的选择范围较宽;本身不带CIts857基因的表达载体,选择宿主菌时,要求宿主是有缺陷的原噬菌体溶源化的菌株(如M5219)。前一类载体表达效率往往更高。
图示为pBV220表达载体的结构示意图。血管生长素(ANG)基因插入pB220载体多克隆位点中,转化到大肠杆菌JM103内,便能通过温度的变换控制CI阻遏蛋白的活性,继而调节PL和PR启动子的活性,使ANG基因连同其5′端上游所带的SD 序列转录成mRNA (SD序列与起始密码ATG的间距为6bp),mRNA作为模板使核糖体高效翻译出ANG产物,并终止于rrnB位点。