心脏衰竭

 

　　目的　本研究评价了中药鹿茸液对CHF大鼠心功能、心肌细胞凋亡及I、III型胶原和AQP2的影响，初步探讨鹿茸液改善心功能的作用机制和途径，为其进一步的临床应用提供了科学依据。

　　方法　动物实验采用结扎大鼠冠状动脉前降支法制作了心肌梗死后形成的CHF模型。观察了鹿茸液对慢性充血性心力衰竭大鼠的强心作用，以超声心动测量大鼠心功能变化，同时采用原位杂交法探讨心肌细胞凋亡及I、III型胶原和AQP2的影响。

　　结果

　　(1) 造模后CHF大鼠心脏泵功能出现明显下降，鹿茸液能够明显改善CHF大鼠心脏泵功能，可提高EF、FS%、CO，较心衰值相比有显著统计学意义（P＜0.05），鹿茸液中剂量组和卡托普利组在改善EF、FS%方面相比无统计学差异（P＞0.05），鹿茸液中剂量组优于高剂量组，高剂量组优于低剂量组。

　　(2) 鹿茸液各剂量组CHF大鼠心肌细胞凋亡的表达与模型组相比较低，二者具有统计学差异（P＜0.05），鹿茸液中剂量组和卡托普利组之间无统计学差异（P＞0.05），并且鹿茸液中剂量组优于高剂量组，高剂量组优于低剂量组。

　　(3) 鹿茸液各组I、III型胶原表达较模型组低，相比具有统计学差异（P＜0.05），鹿茸液中剂量组和卡托普利组之间无统计学差异（P＞0.05），并且鹿茸液中剂量组优于高剂量组，高剂量组优于低剂量组。

　　(4) 模型组大鼠肾脏髓质集合管AQP2mRNA表达与正常组相比显著增高，鹿茸液中剂量组和卡托普利组与模型组相比，AQP2mRNA的表达明显下调，但鹿茸液中剂量组比卡托普利组AQP2mRNA的表达高。鹿茸液高剂量和低剂量组与模型组相比，AQP2mRNA的表达也有所下调，但其下调程度远不如鹿茸液中剂量组和卡托普利组。提示鹿茸液能减少CHF模型大鼠AQP2mRNA的表达。

　　结论　鹿茸液对慢性心衰大鼠的左室形态、心功能有改善作用；能够减少心肌细胞凋亡，减少I、III型胶原沉淀，并且能降低CHF大鼠AQP2mRNA的表达。从而抑制左室重构。鹿茸液对慢性心力衰竭具有良好的疗效，并能延缓和制止心衰的发展进程，改善预后，疗效确切，具有良好的临床研究前景。

   

    慢性心力衰竭（CHF）是多种心血管疾病走向死亡的最后转归，随着人口老龄化进程的加快，CHF的发病率正逐年升高。目前我国CHF患病率为0.9%，35～75岁人群中有400万心衰患者。5年存活率同恶性肿瘤相仿。近年来，随着国内外分子生物学的发展，认识到CHF是一种临床征候群，由心脏疾患引起的心脏排血量降低，静脉压增高，神经内分泌系统激活，并伴有心脏分子结构异常和导致衰竭心脏进行性恶化，而心室重构是CHF病理生理学发展的重要机制。目前的治疗方法并不令人满意。

    中医认为心衰病机以正虚为本，以邪实为标，其中本虚又以气虚阳虚多见。中药治疗心衰取得了良好的疗效。鹿茸为传统中药之补阳药，具有补肾阳、益精血、强筋骨的作用。现代药理学研究证实，鹿茸的有效成分能促进生长发育、提高机体的工作能力、减轻疲劳，改善蛋白质代谢障碍和改善能量代谢，中等剂量的鹿茸能引起心率加快，每分输出量增加。

 

    采用结扎大鼠左冠状动脉前降支法造成心肌梗死后心衰的模型。大鼠麻醉后开胸暴露心脏，于左心耳下缘3mm处结扎左冠状动脉前降支，以心电图出现ST段弓背向上抬高为急性心肌梗死模型的成功标志。术后常规饲养。3周之后检测超声进行心功能检查，以EF值降至60%以下为心衰模型成功标志。

    模型成功后，将大鼠随机分为以下6组：连续灌胃给药4周，分别在第2、第4周时检测心功能指标。

    鹿茸提取物高剂量组：给与鹿茸提取物5g kg^-1 ·d^-1；

    鹿茸提取物中剂量组：给与鹿茸提取物2.5g kg^-1 ·d^-1；

    鹿茸提取物低剂量组：给与鹿茸提取物1.25g kg^-1 ·d^-1；

    卡托普利组：给与卡托普利50mg kg^-1 ·d^-1；

    模型组：；给与蒸馏水10ml kg^-1 ·d^-1；

    正常组：不进行药物干预，常规饲养，给与蒸馏水10ml kg^-1 ·d^-1；

    参照文献方法，动物麻醉，取平卧位，剪去胸前区毛，涂耦合剂。采用二位超声心动图，选用9 MHz高频矩阵探头，垂直于左胸壁，并与胸骨成10º～30º夹角，显示心脏沿二尖瓣口至心尖方向的左室长轴像。于左室内径最大处(即乳头肌水平)显示M型超声图像，测量射血分数(EF)，心输出量(CO)和左室短轴缩短率(FS) ，取3个心动周期平均值记录数据。

    原位细胞凋亡检测试剂盒TUNEL（POD）编号TBD2020POD，购于自天津市灏洋生物制品科技有限责任公司，按说明书操作。

    结果判断：棕黄色或棕褐色细胞核为凋亡细胞，蓝紫色为非凋亡细胞；阴性对照片无棕黄色着色。在200倍光镜下随机选取5个无重叠视野，计算在100个细胞中的凋亡细胞数，以平均计数阳性细胞核数所占的百分比作为凋亡细胞阳性指数(apoptotic index, AI)。

    采用Collagen I 大鼠 mRNA原位杂交DIG染色系统试剂盒，编号FISH2005CO，Collagen III 大鼠 mRNA原位杂交DIG染色系统试剂盒，编号FISH2005CP，购于自天津市灏洋生物制品科技有限责任公司，按照说明书要求进行。

    设计大鼠I 型胶原DNA序列如下：(1) 5’ --- GGCCA CCGCC CTCCT GACGC ACGGC CAAGA ---3’ ；(2) 5’ ---ACTTC AGCTT CCTGC CCCAG CCACC TCAAG---3’ ；III型胶原DNA序列：(1) 5’ --- GGTCC AGTCT CCCCA CCTCC TCCAG CAG ---3’ ；(2) 5’ ---GGGCA CCTCT TTCTC CTTTA GCACC TGG---3’。

    结果判断：光学显微镜下观察，细胞浆显棕黄色颗粒为阳性反应，胞核为蓝色。在200倍光镜下随机选取5个无重叠视野，计算阳性细胞的个数，取其平均值。

    采用AQP2多点标记的DIG（地高辛）探针原位杂交基本的实验方，探针序列：5’-TTGTA GAGGA GGGAA CCGAT GATGG CG适合于MAqp2（mRNA），ISH DIG Kit 编号：aqp2008fish，购于自天津市灏洋生物制品科技有限责任公司，按照说明书要求进行。每例取10张阳性染色切片，在20х10光镜下对每张切片阳性细胞进行计数，取其平均值。

    统计学方法采用SPSS13统计软件，计量资料采用均数±标准差（ ）进行统计描述，两组间用T检验，多组间用单因素方差分析，P＜0.05为差异有显著性。

 

    给药2周后鹿茸高、中剂量组、西药卡托普利组的EF、FS值与心衰值相比均有显著性改善（P＜0.01），给药4周后其EF、FS值继续呈现升高趋势。给药4周后鹿茸中剂量组的CO有提高（P＜0.05），其他各组均无统计学差异。

    表1　每分输出量CO.

	正常值	心衰值	给药2周	给药4周
高剂量	0.079±0.007	0.053±0.016	0.063±0.010	0.074±0.019
中剂量	0.074±0.010	0.056±0.009	0.067±0.009	0.072±0.014#
低剂量	0.078±0.010	0.059±0.016	0.062±0.012	0.062±0.003
西药组	0.076±0.008	0.060±0.010	0.068±0.009	0.061±0.010
模型组	0.076±0.009	0.060±0.017	0.062±0.012	0.062±0.015
正常组	0.081±0.011	0.060±0.013	0.067±0.010	0.068±0.015

    注：与同期模型组相比*P＜0.05 **P＜0.01；与本组心衰值相比#P＜0.05 ##P＜0.01；与同期正常组相比△P＜0.05 △△P＜0.01

   

图11　卡托普利组图                     图12　鹿茸液中剂量组