恩,我的理解
如果是这样那么大概的过程应该是:
设计四条引物。
其中两条里故意包含互补的错误碱基,这两条引物除了错误碱基处外,其他位置正好与目的错误处的两端其他碱基是完全互补的。
另外两条引物是离的很远的上下游引物,不含错误。
然后取一条包含错误的,和一条离的很远的引物,做PCR反应,得出产物;
另外一组也是这么搞,得出产物;这两组产物在那段错误处左右是有重叠的;
将这两组P出来的产物作为模板混一起;
然后再用远离的上下游引物最后P一把这个混合产物,
最后就得出的就是突变出来的序列了。
设计四条引物。
其中两条里故意包含互补的错误碱基,这两条引物除了错误碱基处外,其他位置正好与目的错误处的两端其他碱基是完全互补的。
另外两条引物是离的很远的上下游引物,不含错误。
然后取一条包含错误的,和一条离的很远的引物,做PCR反应,得出产物;
另外一组也是这么搞,得出产物;这两组产物在那段错误处左右是有重叠的;
将这两组P出来的产物作为模板混一起;
然后再用远离的上下游引物最后P一把这个混合产物,
最后就得出的就是突变出来的序列了。
