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耐热大肠菌群

(2007-08-06 22:23:53)
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知识/探索

1         方法依据

《水和废水监测分析方法》(第四版)

2         检测范围

本方法适用于测定生活饮用水、地表水、污水处理厂水中的耐热大肠菌群数。

3         原理

滤膜是一种微孔滤膜,孔径0.450.65祄,能滤过大量水样,并将水中含有的细菌截留在滤膜上,然后将滤膜贴在选择性培养基上,经培养后,直接计数滤膜上生长的典型大肠菌群菌落。

4         设备与试剂

  4.1仪器设备:高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、隔水式恒温培养箱、冰箱、滤器、滤膜(孔径0.450.65祄、直径5.0cm)、真空泵、量筒、无齿镊子等

4.2试剂:M-FC培养基

4.2.1成分:

胰胨   10g      蛋白胨    5g       酵母浸膏   3g      氯化钠   5g

乳糖   12.5g    胆盐三号  1.5g    1%苯胺蓝水溶液  10mL

1%玫瑰色酸溶液(溶于0.2mol/L氢氧化钠溶液中) 10mL  蒸馏水 1000 mL

4.2.2制法:

将上述培养基中的成分(除苯胺蓝和玫瑰色酸外),置于蒸馏水中加热溶解,调节pH7.4,分装于小烧瓶内,每瓶100mL,于115℃灭菌20min。贮于冰箱中备用。

临用前,按上述配方比例,用灭菌吸管分别加入已煮沸灭菌的1%苯胺蓝水溶液1mL及新配制的1%玫瑰色酸溶液(溶于0.2mol/L氢氧化钠溶液中)1mL,混合均匀。

加热溶解前,加入1.2%1.5%琼脂可制成固体培养基。如培养物中杂菌不多,则培养基中不加玫瑰色酸亦可。   

5         实验步骤

5.1准备工作

5.1.1所用到的一切玻璃器皿及无菌室灭菌;

5.1.2滤膜灭菌:将滤膜放入烧杯中,加入蒸馏水,置于电炉上煮沸灭菌三次,每次15min,前两次煮沸后需更换水洗涤23,以除去残留的溶剂;

5.1.3滤器灭菌:用点燃的酒精灯火焰灭菌;

5.1.4用无菌镊子夹取灭菌滤膜的边缘部分,将粗糙面向上,贴放在已灭菌的滤床上,稳妥地固定好滤器

5.1.5100mL水样(如水样含菌数较多,可减少过滤水样量)注入滤器中,加盖,打开真空泵抽滤

5.1.6每次检验时可另做一平行;

5.1.7 水样滤完后,再抽气约5s,关上真空泵,取下滤器,用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分,移放到M-FC琼脂培养基上,滤膜截留细菌面向上,滤膜应与培养基完全贴紧,两者间不得留有气泡

5.1.8将平皿倒置,放入隔水式恒温培养箱中44.5℃±0.5℃培养24h±2h后,进行观察并计数。

5.2观察结果

耐热大肠菌群菌落在M-FC培养基上呈蓝色或蓝绿色,其它非耐热大肠菌群菌落呈灰色、淡黄色或无色。正常情况下,由于温度和玫瑰色酸盐试剂的选择性作用,在M-FC培养基上很少见到非耐热大肠菌群菌落。    

6  结果与表示

计数两个平行平皿上的典型菌落数,这两个平皿上的菌落数应该接近,结果以平均数报出即可。

 

                                                           

 

 

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