阴沟肠杆菌分离琼脂培养基的保存条件与要求是什么？

阴沟肠杆菌分离琼脂培养基的保存条件需严格控制，以维持其选择性、鉴别性能及无菌状态，具体要求如下：

一、未使用的灭菌培养基（固体平板）

1、温度：

需在 2-8（冰箱冷藏） 条件下保存，避免温度波动（如反复取出放回）。低温可减缓培养基成分的降解，同时抑制可能残留的微量杂菌繁殖。

注意：不可冷冻（-20及以下），否则琼脂会因结冰破坏胶体结构，解冻后培养基会出现分层、开裂，失去使用价值。

2、避光：

培养基中的 ONPG（邻硝基苯 -β-D - 半乳糖苷）和酚红指示剂对光线敏感，长期暴露于自然光或强光下会发生分解，影响鉴别效果（如 ONPG 失效导致显色异常）。建议将平板放入不透光的保鲜盒或黑塑料袋中，再置于冰箱内。

3、密封性：

用封口膜密封平板边缘，或放入带有盖子的无菌容器中，防止冰箱内的冷凝水进入平板（导致污染），同时避免培养基水分过度蒸发（否则琼脂表面干裂，影响细菌生长）。

4、保质期：

自配制完成（倒平板凝固）后，保存不超过 1 个月。若使用商品化预制平板，需遵循厂家标注的保质期（通常为 2-4 周，具体以说明书为准）。超过保质期后，抗生素活性可能下降，选择性减弱，需重新验证性能（如做阳性 / 阴性对照试验）后方可使用。

二、配制好的灭菌液体培养基（未倒平板）

若配制后未立即倒平板，需先分装至灭菌容器中，121高压灭菌后：

可在 2-8冷藏 保存，但需在 3 天内使用并倒平板（避免长时间存放导致成分沉淀或抗生素失效）。

若需长期保存，需在灭菌后、未加抗生素前分装，-20冷冻（但需避免反复冻融），使用前解冻并加热溶解，冷却至 50-55时加入除菌后的抗生素，再倒平板。

三、使用后的培养基（含标本或菌落）

若需短期保存分离到的菌落，可在 2-8冷藏，保存时间不超过 48 小时，用于后续鉴定试验。

若需长期保存菌株，应挑取单菌落接种至肉汤培养基中，培养后加甘油冷冻保存，而非依赖 ECIA 平板。

废弃的培养基需按生物安全规范处理（如 121高压灭菌 30 分钟后再丢弃），避免污染环境。

四、关键注意事项

每次从冰箱取出平板后，需在室温下放置 30 分钟左右，待冷凝水蒸发（避免接种时菌落扩散），同时恢复至适宜温度（35-37）再使用。

若发现平板表面有霉斑、浑浊、颜色异常（如酚红过度变黄或变红）、干裂或水分过多，应立即废弃，不可使用。

遵循以上保存条件，可最大程度保证 ECIA 培养基的分离和鉴别效能，确保阴沟肠杆菌检测结果的准确性。

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