菌落计数检测结果有效性控制要点及质量控制措施！

 

百欧博伟生物：保证菌落计数检测结果的有效性至关重要，因为它是评估食品、药品、化妆品、环境样品等微生物安全性的核心指标之一。这需要在整个检测流程（检测前、检测中、检测后）实施严格的质量控制措施。以下是关键的控制点：

 

一、检测前的控制（样品处理与准备）

 

1、代表性采样：

 

采样方法必须科学、规范（如无菌操作、随机取样、足够数量/体积），确保样品能代表整批产品。

 

采样工具、容器必须无菌且不会引入污染或抑制微生物生长。

 

详细记录采样信息（时间、地点、方法、人员等）。

 

2、样品运输与储存：

 

在规定的时间和温度条件下运输和储存样品（通常冷藏，并尽快检测），防止微生物数量发生显著变化。

 

避免样品受到污染、破损或极端条件影响。

 

3、样品处理：

 

均质/稀释：使用无菌稀释液和均质袋/均质杯，确保样品充分混匀。均质时间、转速需标准化。

 

稀释过程：严格无菌操作，使用经过校准的无菌移液管/移液器。每一步稀释必须混匀充分。稀释梯度选择合理，确保最终能出现可计数的平板。

 

稀释液选择：使用适宜的缓冲液（如0.85%生理盐水、磷酸盐缓冲液等），不会影响目标微生物的复苏和生长。

 

二、检测中的控制（培养与计数）

 

1、培养基质量控制：

 

来源与验收：使用信誉良好供应商的脱水培养基或预制培养基。

 

制备：严格按照说明书配制（称量、溶解、pH值调节、灭菌温度和时间）。记录配制批号、日期、人员。

 

性能测试：

 

无菌性检查：每批培养基灭菌后，随机抽取一定数量进行培养（通常35±1°C，48-72小时），确保无菌生长。

 

促生长能力：使用规定的标准菌株（如金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、枯草芽孢杆菌等）进行定量接种，检测其复苏率和生长情况，应达到规定的回收率（通常≥70%）。

 

选择性（如适用）：对于选择性培养基，需验证其抑制非目标菌的能力和允许目标菌生长的能力。

 

物理性状：检查培养基的凝固性、颜色、均一性等是否符合要求。

 

2、培养条件控制：

 

温度：培养箱温度必须准确、均匀且稳定（如35±1°C）。定期使用校准过的温度计多点监测并记录温度。

 

时间：严格按照标准方法规定的培养时间进行培养（如48±2小时）。

 

湿度（如需）：对于需要高湿度的培养（如厌氧培养），确保培养箱/罐内湿度适宜，防止平板干燥。

 

气氛：需氧、厌氧或微需氧培养必须按要求提供正确的气体环境。

 

3、倾注/涂布操作：

 

无菌操作，避免环境或操作者污染。

 

倾注培养基温度需控制在45-50°C左右（不烫手背），防止烫死微生物或影响凝固。

 

倾注后尽快混匀（旋转平板），使菌体均匀分布。

 

涂布需均匀，避免划破琼脂表面。

 

4、平行测试：

 

每个稀释度至少倾注/涂布两个平行平板，增加结果的可靠性和可重复性。

 

5、空白对照：

 

稀释液空白：将无菌稀释液按样品处理方式倾注平板，应无菌生长，验证稀释液无菌。

 

培养基空白：倾注未接种的培养基平板，应无菌生长，验证培养基无菌。

 

环境空白（沉降菌）：在样品处理区域打开平板盖暴露一段时间后培养，监控操作环境洁净度。

 

6、菌落计数规则：

 

选择合适平板：选择菌落数在30-300 CFU之间的平板进行计数（特殊情况如蔓延菌、<30的最高稀释度等按标准规定处理）。

 

识别与区分：准确识别目标菌落（根据形态、颜色、大小等特征，必要时进行确认试验）。区分单个菌落与蔓延菌落、链状菌落（按标准规定计数单个菌落或视为一个菌落）。

 

计数方法：使用菌落计数器或人工计数，避免遗漏或重复计数。对于高密度平板，可分区域计数。

 

记录所有结果：即使不在理想范围，也应记录所有平板的菌落数。

 

三、检测后的控制（结果计算与报告）

 

1、计算：

 

根据选择的平板菌落数和相应的稀释倍数，按照标准方法（如两个连续稀释度都在30-300之间则计算加权平均值；仅一个稀释度在范围内则直接计算；<30的最高稀释度按实际报告等）进行计算。

 

计算结果保留有效数字（通常报告两位有效数字）。

 

2、结果报告：

 

清晰、准确地报告结果。

 

注明检测方法标准号。

 

如果结果低于检测限，应报告为“<1 CFU/g”或“未检出”，并注明检测限。

 

如果结果高于检测上限（如蔓延无法计数），应报告为“>最高可计数稀释度的菌落数”或“蔓延生长”。

 

3、数据审核：

 

结果需经过有经验的人员复核，检查计算过程、稀释度选择、计数规则应用、异常值判断等是否合理正确。

 

检查所有质量控制记录（空白、培养基测试、培养箱温度记录等）是否合格，确保结果在受控条件下获得。

 

4、记录保存：

 

完整、清晰、准确地记录所有原始数据（样品信息、称量/稀释体积、每个平板的菌落数、计算过程、人员、日期、温湿度记录、培养基批号及QC结果、仪器使用记录等）。

 

记录应具有可追溯性，便于复核和溯源。

 

四、整体质量保证体系

 

1、人员培训与能力确认：

 

操作人员必须经过严格培训，理解原理、掌握标准操作程序、熟悉菌落识别和计数规则。

 

定期进行人员能力考核（如盲样测试、平行样测试）。

 

2、设备校准与维护：

 

关键设备（天平、移液器、pH计、培养箱、温度计、均质器、菌落计数器等）必须定期进行校准或检定，并保存记录。

 

进行日常维护和功能检查。

 

3、环境监控：

 

定期对无菌操作区域（超净台/生物安全柜）进行沉降菌、浮游菌或表面微生物监测，确保环境符合要求。

 

4、标准方法：

 

使用国际、国家或行业认可的标准方法，并严格遵循。

 

5、实验室间比对/能力验证：

 

定期参加权威机构组织的能力验证或实验室间比对活动，评估实验室检测结果的准确性和可比性。

 

6、内部质量控制：

 

定期使用标准物质（有证参考物质CRM或实验室内部质控样品）进行测试，监控检测系统的稳定性。

 

定期进行重复测试（同一样品不同人员或不同时间测试）。

 

7、异常结果调查：

 

建立程序，对异常结果（如空白长菌、质控样品不合格、结果显著偏离预期等）进行调查，找出根本原因并采取纠正措施。

 

总结来说，保证菌落计数结果有效性的核心在于：

 

预防污染：严格的样品处理、无菌操作和环境控制。

 

保证复苏与生长：高质量的培养基、正确的培养条件和稀释方法。

 

准确计数：清晰的计数规则、熟练的识别能力和可靠的计数工具。

 

全程受控：完善的质量控制措施（空白、平行、培养基测试、设备校准等）覆盖检测全过程。

 

可追溯性：详实、准确的记录。

 

人员能力：合格且持续受训的操作人员。

 

质量管理体系：建立并有效运行符合标准的质量管理体系。

 

只有系统性地实施以上所有环节的质量控制，才能最大程度地保证菌落计数检测结果的准确性、可靠性和有效性。

 

北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！