人原代动脉外膜成纤维细胞的分离与培养方法及应用研究！

 

 

人原代动脉外膜成纤维细胞（Human Primary Adventitial Fibroblasts）是从人体动脉外膜组织中直接分离培养的成纤维细胞，广泛用于血管生物学、纤维化疾病及心血管疾病的研究。以下是关于该细胞的系统介绍：

 

1、细胞特性

 

来源：动脉血管壁的外膜层（Tunica Adventitia），主要由胶原纤维、弹性纤维和成纤维细胞构成。

 

功能：分泌细胞外基质（ECM）、调控血管重塑、参与炎症反应和纤维化过程。

 

标记物：

 

阳性标记：Vimentin（波形蛋白）、Collagen I/III（胶原蛋白）、α-SMA（在活化状态下表达）。

 

阴性标记：CD31（内皮细胞标记）、CD45（白细胞标记）用于排除污染。

 

2、分离与培养方法

 

组织来源：手术切除的人体动脉（如主动脉、冠状动脉等），需遵循伦理规范。

 

分离步骤：

 

酶消化法：用胶原酶（如型或型胶原酶）和弹性酶消化外膜组织；

 

机械分离：剪碎组织后过滤去除未消化的碎片；

 

离心纯化：通过差速离心收集细胞；

 

原代培养：接种于含10% FBS的DMEM/F12培养基，37、5% CO条件下培养。

 

注意事项：

 

避免内皮细胞或平滑肌细胞污染，可通过差速贴壁或流式分选纯化；

 

原代细胞传代次数有限（通常≤5代），需及时冻存。

 

3、研究应用

 

血管疾病机制：研究动脉硬化、动脉瘤、血管狭窄中成纤维细胞的活化（转化为肌成纤维细胞）及ECM沉积。

 

纤维化模型：探究TGF-β、PDGF等信号通路在血管纤维化中的作用。

 

药物筛选：测试抗纤维化药物、抗炎药物对细胞活性的影响。

 

细胞互作研究：与内皮细胞、平滑肌细胞共培养，模拟血管微环境。

 

4、常见问题与解决方案

 

细胞污染：

 

微生物污染：严格无菌操作，添加抗生素；

 

其他细胞污染：通过免疫荧光或流式细胞术鉴定纯度。

 

细胞老化：

 

原代细胞易衰老，表现为增殖减缓、形态扁平，建议使用低浓度血清（2-5% FBS）减缓老化。

 

活化状态调控：

 

使用TGF-β1（10 ng/mL）诱导成纤维细胞向肌成纤维细胞分化；

 

抑制活化可尝试使用TGF-β受体抑制剂。

 

5、相关研究进展

 

前沿方向：

 

外膜成纤维细胞在血管钙化中的作用；

 

单细胞测序揭示细胞异质性；

 

细胞外囊泡（EVs）在血管修复中的功能。

 

6、总结

 

人原代动脉外膜成纤维细胞是研究血管病理机制的重要工具，需注重分离纯化技术和培养条件优化。在实验设计中，建议结合病理模型模拟疾病状态，以深入探索其功能及治疗靶点。

 

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