改良察氏液体培养基的注意事项有哪些？具体是什么？

改良察氏液体培养基的注意事项围绕“无菌性、营养稳定性、适配性”展开，覆盖配制、灭菌、使用、储存全流程，直接影响微生物生长和实验结果准确性。

一、配制阶段注意事项

精准称量成分，尤其是微量元素（如硫酸亚铁、硫酸锌），过量可能抑制微生物生长。

溶解时按“先难后易”顺序，先溶解无机盐（如磷酸二氢钾、硫酸镁），再加入蔗糖、淀粉等碳源，避免结块。

调节 pH 值时需用精密 pH 计，按目标菌种需求校准（真菌 5.5-6.5，放线菌 6.5-7.0），避免 pH 偏差导致营养吸收受阻。

用去离子水或蒸馏水配制，避免自来水含有的氯、重金属等杂质干扰培养。

二、灭菌与冷却阶段注意事项

分装后及时灭菌，避免培养基放置过久滋生杂菌，三角瓶装液量不超过容积的 1/2，防止振荡培养时溢出。

高压蒸汽灭菌参数严格控制为 121、20 分钟，温度或时间不足会导致灭菌不彻底，过长则破坏营养成分。

灭菌后快速冷却至 45以下，可置于无菌环境中自然冷却或用冷水浴降温，减少营养成分降解。

冷却后检查培养基状态，若出现浑浊、沉淀或异味，说明可能污染，需废弃重配。

三、接种与培养阶段注意事项

接种需在超净工作台中进行，接种工具（移液管、接种环）需经干热或湿热灭菌，避免交叉污染。

接种量控制在 1%-5%，接种量过大易导致营养耗尽过快，过小则延长生长周期，需根据菌种生长速率调整。

振荡培养时，摇床转速保持 150-200rpm，确保培养基溶氧充足，静置培养仅适用于厌氧或微需氧菌种。

培养温度需恒定，避免昼夜温差过大，真菌一般 25-30，放线菌 28-32，波动不超过 ±1。

四、储存与后续处理注意事项

未接种的灭菌培养基，可在 4冰箱中密封储存，保质期不超过 7 天，使用前需复温至室温并摇匀。

培养结束后，含菌种的培养基需经高压灭菌处理（121、30 分钟）再废弃，避免微生物扩散污染环境。

反复使用的配制容器（烧杯、三角瓶），需用稀盐酸浸泡去除残留水垢，再经灭菌备用。

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