
1.取肝素抗凝血2ml,加入3倍体积的溶液A(O.32 mol/L蔗糖,1% Triton X-100,0 005 mol MgC12·6H20,0.012 mol/LTris-HC1,pH7.5),混匀,500 x g,离心8 min,用溶液B(25mmol/L Tris,0.136 mol/L Na C1,2.7mmnol/L KC1 pH7.4)适量重悬,分成2个Eppendof管中,1500 x g离心,4 min。用溶液B再洗1次后,用适量溶液c洗1次(0.1 mol/L Na C1,10mmol/LTris·HC1、1 mmol/L EDTANa2·2H2O,pH 7.6)沉淀白细胞。
2.白细胞、线粒体的裂解及mtDNA的释放:每个Eppendof管中加入150μl溶液D(50 mmoL葡萄糖、25 mmol/L Tris·HC1、30 mmol/L EDTANa2=(2 H2O,pH 8.0,4℃保存),冰上混匀;缓慢加入30μl溶液E(O.2 mol/L NaOH,1% SDS,用前新鲜配制),轻轻颠倒6-8次,冰上放置8min;缓慢加入225 溶液F (3 mol/L KAC,5 mol/L醋酸根离子,pH 5.4,4℃保存),轻柔混匀6-8次,冰浴放置25 min,1000xg离心,10-20 min。